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糖尿病药筛方案(小鼠版)

日期:2013-03-26 20:45:30点击:1066

来源:博爱港
糖尿病模型(DM)是胰岛素抵抗和胰岛素缺乏导致的以高血糖为主要特征表现的代谢紊乱综合征,易发生心、脑、肾等并发症。糖尿病状态下血浆游离脂肪酸异常增高,心肌耗能增加,葡萄糖代谢下降,脂肪酸代谢增加,心脏内过量的脂肪酸摄取和氧化导致心肌内脂肪代谢产物的积聚引起心脏脂质毒性,并在此基袖上出现氧化应激,导致细胞调亡、内皮功能紊乱、炎症反应增加,同时出现心肌的损伤,心肌的结构和功能均发生改变,最后导致糖尿病患者的死亡。

Ⅱ型小鼠造模及治疗方案

动物选取

SPF级Balb/C小鼠,雄性,周龄为4w~6w,体重为18g~20g。
经验:先适应性喂养一周,体内外环境适应,一周后体重体重水平20-24g.

高脂喂养
高脂喂养4-6周,体重达到32g以上。

高脂饲料

BJBAG1035DM (日粮型),BJBAG12451M(纯化型),同时设立空白组。

预试验阶段

1.预实验分组:

造模梯度试验分3组(例如:120mg/kg, 110mg/kg,100mg/kg)。

备注:预试剂量值选取,和批次体重水平相关。体重水平高,应调低单位给药量水平,不同品系和重量水平的给药推荐可以咨询我公司技术客服。

2.治疗份组:对照组(模型组)、阳性药组、受试药组(三个浓度)。

3.组只要求:建议每组10-15只动物。
  备注:统计学要求,组只10只以上,具备统计学意义。

4. 实验周期:适应性喂养1w+模型判定2w+治疗(4-12w)+取材

STZ注射及缓冲液配置

5. 柠檬酸钠缓冲液配制:将2.10 g柠檬酸加入双蒸水100 ml配成柠檬酸母液, 称为A液; 将2.94g柠檬酸三钠加入双蒸水100 ml配成柠檬酸钠母液,称为B液; 将A、B液按1:1比例(或1:1.32)混合,pH计测定pH值,调定溶液pH=4-4.4之间,即是所需配制STZ的0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液。

6. STZ溶液的配制:按1%稀释STZ, 即10mgSTZ:1mlSTZ,并用0.22μm滤菌器过滤除菌。现用现配。

正式造模

7.空腹12h,建议隔夜禁食;

8. 模型组小鼠按照预实验摸索的剂量注射STZ, 腹腔注射或静脉注射。

9. STZ注射3d后,测空腹血糖,选择血糖高于16. 7 mmol/L纳入正式实验。

10. 治疗(药物干预)阶段,设立对照组,对照组应同步注射药物稀释液,每周测血糖、体重,观察体重血糖变化。

取材阶段

11.治疗结束后,根据测量值的需求,选取对应的固定方法进行取材。取黄脂,皮下脂肪,骨骼肌,白脂,肝脏,肺脏,心脏,肾脏用于病理和分子生物学检测,摘眼球采血,室温静置2h后于4℃ 3000r离心10分钟提取血清,放入-80冰箱冻存。

模型评价

1. 大体观察:正常组小鼠体型适中,精神状态良好,动作自如,反应灵敏,毛发平伏有光泽。而糖尿病小鼠体重变轻,精神萎靡,反应迟钝,毛竖无光泽,动作迟缓,弓背捲体,尿量显著增加。糖尿病小鼠较正常组体重显著减轻,心脏系数、肝脏系数较正常组有显著增加,且有统计学意义。

2. 空腹血糖、甘油三酯和总胆固醇水平的变化:

正常对照组的空腹血糖、甘油三酯和总胆固醇水平在实验前后均无显著差异;

模型组的空腹血糖、甘油三酯和总胆固醇水平显著高于对照组,

3. 糖尿病小鼠心脏组织形态学的变化

经HE染色可见正常对照组小鼠心肌纤维排列整齐,致密,结构清晰,细胞核染色质分布均匀,细胞外间质较少,微血管结构正常,可见少量成纤维细胞,间质无明显的炎症细胞浸润;糖尿病模型组小鼠心肌纤维排列紊乱,心肌细胞肥大,细胞间隙增大,结构不清晰,有的细胞核膜皱缩,核固缩,并有炎症细胞浸润,肌细胞间也可见成纤维细胞浸润

4. 糖尿病小鼠肺脏组织形态学的变化

HE染色显示,对照组小鼠肺组织结构清晰,肺泡分布均勾,肺泡隔、支气管

壁完整,肺间质分布均勻,少见炎性细胞浸润;DM组小鼠肺组织结构紊乱,部分肺泡腔萎缩、塌陷,可见肺大泡,支气管壁增厚,肺间质和血管周围细胞外基质增多,成纤维细胞增多,并有大量炎症细胞浸润,

5. 糖尿病小鼠肾脏组织形态学的变化

HE染色显示,DM组小鼠肾小球肥大增生,肾小球系膜基膜增厚,肾小管空泡变性,胞质空亮。

6. 糖尿病小鼠肝脏组织形态学的变化

经油红O染色可见糖尿病小鼠肝内脂滴较大,红色脂滴明显,肝脏可见显著的脂质沉积。

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